ELISA方法可以分為兩類。**類:生物大分子的定量,**類:親和力測定評價或者篩選。抗體的穩(wěn)轉(zhuǎn)、瞬和發(fā)酵過程的表達量監(jiān)控,細胞因子的監(jiān)控,體內(nèi)抗體藥物的藥代動力學,藥效生物標志物的含量檢測和免疫原性測定等可劃分為**類使用目的,雜交瘤的滴度測定,噬菌體展示的淘選篩選,體外抗體和對應(yīng)靶點蛋白或細胞表面受體的親和力評價可劃分為**類使用目的。使用目的不一樣,即使使用同樣的試劑材料,也會有不同實驗?zāi)J胶蛿M合曲線。下面小編將以某抗體的定量的方法開發(fā)(**類目的)和親和力檢測方法開發(fā)(**類目的)為例,對不同使用目的開發(fā)策略進行介紹。
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●利用干擾實驗即可鑒別ELISA試劑盒是否檢測目的抗原,方法如下:● (1) 將針對試劑盒特異性的重組蛋白抗原和試劑盒中的檢測抗體配置成antibody: antigen= 1:2的混合孵育液 (2) 37℃孵育15分鐘后,代替原試劑盒中的檢測抗體 (3) 后續(xù)操作按照試劑盒說明書進行,加檢測抗體、酶復合物和底物 (4)實驗完畢后,檢測其標準曲線,如果標準曲線良好則說明加入的目的抗原和試劑盒抗體不匹配,試劑盒檢測抗體針對的是非目的抗原,該試劑盒為偽劣假造ELISA試劑盒。 (5) 如果標準曲線無線性,則說明試劑盒檢測抗體已被目的抗原中和或干擾,影響了其實際試劑盒抗體的檢測作用,則該試劑盒檢測抗體針對的是目的抗原。
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編輯:小檀20180918
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